貨號(hào)：70022 mRNA純化試劑盒 (12)
英文名稱：Oligotex mRNA Mini Kit (12)
中文名稱：mRNA純化試劑盒 (12)
品 牌：Qiagen
貨 號(hào)：70022
從總RNA中純化mRNA以及回收體外轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物
只需30分鐘即可獲得高產(chǎn)量純MRNA
無(wú)需使用Oligo-DT纖維素或乙醇沉淀
靈活性強(qiáng)，適合不同起始量的RNA樣品
|
Oligotex mRNA Kits可從總RNA中純化mRNA，回收poly A+體外轉(zhuǎn)錄子。每個(gè)Oligotex Kit包括用于結(jié)合poly A+ mRNA的Oligotex樹脂和用于洗滌、洗脫結(jié)合的mRNA的離心柱。Oligotex Direct mRNA Kits可從細(xì)胞和組織中純化mRNA。
特點(diǎn)
|
參數(shù)
|
|
應(yīng)用
|
PCR, real-time PCR, microarray, transfection..
|
|
洗脫體積
|
20–100 μl
|
|
規(guī)格
|
Spin column
|
|
主要樣本類型
|
Total RNA
|
|
處理
|
Manual (centrifugation)
|
|
純化總RNA、miRNA、poly A+ mRNA、DNA或蛋白
|
Poly A+ mRNA
|
|
樣本量
|
<250 μg
|
|
穩(wěn)定
|
Yes
|
|
技術(shù)
|
Polystyrene-latex particles
|
|
每次運(yùn)行或制備時(shí)間
|
33–50 minutes
|
|
產(chǎn)量
|
>90% recovery
|
性能
Oligotex mRNA kits適用于從少于0.25 mg到1 mg總RNA起始材料中分離mRNA（見表）。
使用Oligotex樹脂純化的Poly A+ mRNA適用于RT-PCR（參見RT-PCR of beta-actin mRNA），使用Oligotex樹脂從總RNA中純化的poly A+ mRNA已被用于Northern 印記、點(diǎn)印記或狹縫印記（參見Isolation of mRNA from total RNA）。
|
表. Oligotex mRNA kits的規(guī)格每次實(shí)驗(yàn)起始材料量（總RNA）
|
每個(gè)Oligotex mRNA Mini Kit*最多制備次數(shù)
|
每個(gè)Oligotex mRNA Midi Kit*最多制備次數(shù)
|
|
≤0.25 mg
|
12 (13)?
|
12 (28)?
|
|
0.25—0.5 mg
|
6
|
12 (14)?
|
|
0.5—0.75 mg
|
4
|
12 (14)?
|
|
0.75—1 mg
|
3
|
12
|
* 使用離心管操作流程。批量實(shí)驗(yàn)流程可選。
? 購(gòu)買額外的離心柱后，每個(gè)試劑盒的最多制備次數(shù)。可能需要額外的1.5 ml微離心管。
原理
Oligotex mRNA Kits含有離心柱和各種必需的試劑，用于從總RNA樣品中純化poly A+ mRNA或回收體外轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物。Oligotex樹脂由大小均一（直徑1.1 μm ）的聚苯乙烯-橡膠顆粒組成，為完美的球狀（參見Oligotex particles and oligo-dT cellulose），含有與表面共價(jià)結(jié)合的dC10T30寡核苷酸。Oligotex顆粒的大小、成分和表面結(jié)構(gòu)經(jīng)優(yōu)化，均勻分散并需要最少的離心時(shí)間。顆粒形成穩(wěn)定的懸浮液，為快速和高效結(jié)合多聚腺苷酸提供較大的表面積。
高效率、高精確度的雜交確保通過(guò)快速、高效的雜交獲得高純度的poly A+ mRNA。mRNA回收率通常都高于90%。Oligotex純化過(guò)程將poly A+ RNA流失降至最低，避免RNase降解風(fēng)險(xiǎn)，手動(dòng)操作時(shí)間最少化。這些都使得該產(chǎn)品是同步處理多個(gè)樣品的理想選擇。Poly A+ mRNA適用于各種標(biāo)準(zhǔn)應(yīng)用，也適用于敏感應(yīng)用，如表達(dá)分析、差異顯示、cDNA文庫(kù)構(gòu)建、顯微注射和SAGE技術(shù)。Oligotex Suspension也可單獨(dú)購(gòu)買。
操作流程
經(jīng)優(yōu)化的Oligotex純化流程方便簡(jiǎn)單（參見Oligotex mRNA procedure），將總RNA與Oligotex樹脂共同孵育，簡(jiǎn)單離心收集Oligotex:mRNA復(fù)合物。試劑盒中提供的離心柱提供最方便的操作，同時(shí)為某些應(yīng)用提供可選的批量操作流程。洗滌之后，用小體積量的Tris緩沖夜或水洗脫mRNA。無(wú)需乙醇沉淀。
應(yīng)用
使用Oligotex樹脂純化的Poly A+ mRNA適用于多種下游應(yīng)用，包括：
RT-PCR
CDNA合成
CDNA庫(kù)的構(gòu)建
消減雜交
體外翻譯