貨號：59824 快速亞硫酸氫鹽轉化試劑盒 (50)
英文名稱：EpiTect Fast DNA Bisulfite Kit (50)
中文名稱：快速亞硫酸氫鹽轉化試劑盒 (50)
品 牌：Qiagen
貨 號：59824
對來自基因組DNA、福爾馬林固定石蠟包埋（FFPE）樣本、細胞或組織樣本的DNA進行超快速、高效的亞硫酸氫鹽轉化
優化的操作流程對胞嘧啶轉化率超過99%
新型Bisulfite Solution可在少至30分鐘內完成有效地亞硫酸氫鹽轉化
可用于基因組DNA、全血、培養細胞、組織樣本和福爾馬林固定石蠟包埋（FFPE）切片
快速、簡潔的操作流程，有效轉化和純化DNA
獨特的DNA Protect技術可防止DNA降解
EpiTect Fast Bisulfite Conversion Kits可在少至30分鐘內將未甲基化的胞嘧啶高效轉化成尿嘧啶，起始材料選擇也有出色的靈活性。簡化的樣本裂解操作流程和直接的DNA亞硫酸氫鹽轉化使轉化過程快速、省力，樣本包括全血、培養細胞、組織樣本、基因組DNA和福爾馬林固定石蠟包埋（FFPE）切片。創新的DNA Protect技術確保有效的DNA變性而不會降解，得到高產量DNA和可重復性結果。此外，轉化DNA可在少至10 μl洗脫緩沖液中洗脫，得到高濃度DNA。
性能
高效亞硫酸氫鹽轉化
在甲基化分析中，對DNA亞硫酸氫鹽處理，將未甲基化的胞嘧啶轉化成胞嘧啶是最關鍵的步驟，因為反應效率會對下游分析的可靠性造成很大影響。EpiTect Fast Bisulfite Conversion Kits含有的創新型Bisulfite Solution可進行超快速、高效的亞硫酸氫鹽轉化，甚至可處理難分析的樣本，如來自女性樣本的X染色體基因組DNA，因為2個X染色體中有一個是高度甲基化的（參見Highly efficient cytosine conversion of X chromosome DNA）。焦磷酸測序對胞嘧啶轉化定量分析表明，與其他供應商的試劑盒相比，EpiTect Fast Bisulfite Conversion Kit的轉化效果明顯更好，特別是當起始材料的量很有限時（參見Superior bisulfite conversion）。
DNA片段化減少
完全亞硫酸氫鹽轉化所需的劇烈條件通常會造成高度DNA片段化和樣本損失，導致DNA產量低、高度片段化DNA以及不可重復的轉化率。QIAGEN獨特的DNA Protect Buffer可防止DNA降解，與其他供應商的試劑盒轉化的DNA相比，可獲得更大片段大小的完全轉化DNA（參見Analysis of DNA fragment sizes after bisulfite conversion）。
原理
DNA樣本的快速、完全的亞硫酸氫鹽轉化對于準確的DNA甲基化分析是必需的。EpiTect Fast Bisulfite Conversion Kits含有的創新型Bisulfite Solution可在少至30分鐘內完成高效的亞硫酸氫鹽轉化。簡化的樣本裂解和轉化操作流程可對DNA進行有效純化和亞硫酸氫鹽轉化，而獨特的DNA Protect技術可最大程度減少亞硫酸氫鹽處理時的DNA片段化。3種EpiTect Fast Bisulfite Conversion Kits相互聯系，形成的完整系統可對一系列起始材料的DNA進行直接亞硫酸氫鹽轉化（參見Interconnected protocols of the EpiTect Fast Bisulfite Conversion Kits）。但每種試劑盒特有其獨特之處，重點處理特定樣本類型，各自含有需要的所有緩沖液和試劑。每個試劑盒的組分可有效裂解樣本，減少DNA損失，進行完全亞硫酸氫鹽轉化，并在轉化及DNA回收過程中形成有效保護。
快速亞硫酸氫鹽轉化
EpiTect Fast Bisulfite Conversion Kits提供非常快速、簡潔的操作流程，可有效轉化并純化來自基因組DNA、福爾馬林固定石蠟包埋（FFPE）切片、血液、細胞或組織樣本中的DNA。試劑盒含有高濃度的Bisulfite Solution，將未甲基化胞嘧啶轉化為尿嘧啶所需的時間從幾個小時減少到了30分鐘，含有的制備緩沖液無需在亞硫酸氫鹽處理前分離DNA。而且，亞硫酸氫鹽熱循環程序提供優化的孵育步驟，可使DNA熱變性、磺基化以及胞嘧啶脫氨，使胞嘧啶轉化率超過99%。胞嘧啶轉化的最后一個步驟是脫磺基化，此過程可在純化流程時簡單柱上完成。
DNA Protect Buffer
樣本DNA的快速、完全的亞硫酸氫鹽轉化對于正確確定甲基化模式是最關鍵的。這個過程需要將DNA在高濃度亞硫酸氫鹽、高溫、低pH條件下孵育。這些劇烈的條件經常造成高度DNA片段化和純化時的DNA損失。普通亞硫酸氫鹽轉化需要大量的起始DNA，以彌補轉化時的DNA降解和純化時的DNA損失，這常常導致DNA產量低、片段化高和不可重復的轉化率。使用EpiTect Fast Bisulfite Conversion Kits時，獨特的DNA Protect Buffer可在亞硫酸氫鹽轉化時防止由于高溫、低pH值造成的DNA片段化。此緩沖液還可使DNA有效變性，得到完全胞嘧啶轉化所需的單鏈DNA。DNA Protect Buffer含有方便的pH指示劑，可確保胞嘧啶轉化時具有正確的pH（參見DNA Protect Buffer）。
福爾馬林固定石蠟包埋（FFPE）樣本的脫蠟
從福爾馬林固定石蠟包埋（FFPE）樣本中抽提DNA的第一步是脫蠟，石蠟先是被熔解再被去除，暴露出的樣本進行后續的裂解液和蛋白酶K處理。EpiTect Fast FFPE Bisulfite Kit中含有的新型化學試劑Deparaffinization Solution可優化福爾馬林固定石蠟包埋（FFPE）切片的去石蠟、裂解和解交聯過程。Deparaffinization Solution可獲得高DNA回收率，因為溶液在樣本上時就可進行蛋白酶K消化。由于無需沉淀福爾馬林固定石蠟包埋（FFPE）樣本或去除含有石蠟的上清，可避免脫蠟時的樣本損失風險。
操作流程
EpiTect Fast Bisulfite Conversion Kit操作流程包括幾個簡單的步驟：從樣本中制備DNA，未甲基化胞嘧啶的亞硫酸氫鹽轉化；轉化的單鏈DNA結合到MinElute DNA離心柱膜上；洗滌；膜上結合DNA的去磺基化；漂洗膜上結合DNA，去除去磺基化試劑；從離心柱上洗脫純化的轉化DNA。福爾馬林固定石蠟包埋（FFPE）切片、全血、細胞培養基或組織樣本的制備是不同的，但是提取DNA的亞硫酸氫鹽轉化流程對所有樣本類型都是相同的（參見Interconnected protocols of the EpiTect Fast DNA Conversion Kits）。所有實驗方案可獲得相同的胞嘧啶轉化率，轉化DNA的純化也能獲得同等DNA回收，與DNA起始量無關。
試劑盒描述
EpiTect Fast DNA Bisulfite Kit
EpiTect Fast DNA Bisulfite Kit包括精心配制的緩沖液和試劑，可對基因組DNA進行簡潔、有效的亞硫酸氫鹽轉化和對轉化DNA的回收（參見EpiTect Fast DNA Bisulfite Kit procedure）。新型Bisulfite Solution可在少至30分鐘內進行完全亞硫酸氫鹽轉化，運用DNA Protect技術和QIAGEN離心柱可獲得很少降解的完全轉化DNA，在10 μl洗脫液中洗脫，用于需要高濃度的下游應用。EpiTect Fast DNA Bisulfite Kit在20 μl體系中可轉化1 ng–2 μg DNA，在最大40 μl體系中可轉化1–500 ng DNA。
EpiTect Fast FFPE Bisulfite Kit
EpiTect Fast FFPE Bisulfite Kit可處理福爾馬林固定石蠟包埋（FFPE）組織，EpiTect Fast FFPE Lysis Kit含有的專門緩沖液可有效去石蠟并裂解福爾馬林固定石蠟包埋（FFPE）切片（參見EpiTect Fast FFPE Bisulfite Kit procedure），EpiTect Fast DNA Bisulfite Kit可對提取的DNA進行快速、有效的亞硫酸氫鹽轉化。實驗方案包括的優化步驟便于DNA結合，可用于單個福爾馬林固定石蠟包埋（FFPE）組織切片（厚度為10 μm）。從福爾馬林固定石蠟包埋（FFPE）組織中提取DNA很難避免DNA片段化，后續亞硫酸氫鹽處理時的劇烈條件更會加重片段化。QIAGEN提供可靠地DNA Protect技術可最大程度減少轉化反應造成的片段化，獲得更高產量的亞硫酸氫鹽轉化DNA。
EpiTect Fast LyseAll Bisulfite Kit
EpiTect Fast LyseAll Bisulfite Kit可處理全血、培養細胞或組織樣本，EpiTect Fast LyseAll Lysis Kit（參見EpiTect Fast 96 LyseAll Bisulfite Kit procedure）含有新型裂解緩沖液，EpiTect Fast DNA Bisulfite Kit可對提取DNA進行亞硫酸氫鹽轉化。實驗方案包括的優化步驟便于DNA結合，獨特配制的裂解緩沖液使DNA從樣本中釋放更為簡潔。此試劑盒可用于0.5–20 μl血液或10–105個細胞（少至60 pg DNA）。
應用
EpiTect Fast Bisulfite Conversion Kits可對各種起始材料的DNA進行快速、有效的亞硫酸氫鹽轉化，非常適合DNA甲基化分析的技術，包括：
PCR：終點、Real-Time和甲基化特異性PCR
亞硫酸氫鹽測序（直接和克?。?/span>
COBRA (Combined Bisulfite Restriction Analysis)
焦磷酸測序